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MSC猪骨髓间质干细胞

¥1800
ATCC来源
中国
2021-06-11 17:26

上海雅吉生物科技有限公司

我要认领
上海雅吉生物科技有限公司
高杰
15821073967 021-34661275
yajikit@163.com
58268971
产品属性
数量 20
细胞类型 I类
品系 优良品
组织来源 ATCC来源
物种来源 ATCC来源
细胞形态 贴壁
器官来源 ATCC来源
运输方式 常温运输或冻存干冰运输
年限 3~5代
生长状态 优良
规格 5×106cells/T25细胞培养瓶
产品说明
产品名称:MSC猪骨髓间质干细胞
产品规格:5×10^6cells/T25细胞培养瓶
生长条件:
培养条件    具体培养基条件请咨询我们
温度                        37℃
空气条件   5% CO2,95% AIR
传代方法 1:2传代,2~3天换液
冻存条件 90%FBS+10%DMSO
   产品安全性:所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操 作,并请注意防护

MSC猪骨髓间质干细胞,使用方法
1、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:
取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。
MSC猪骨髓间质干细胞,细胞传代:收到细胞后,请对细胞培养瓶外表进行消毒,将细胞置于培养箱中进行 1-2 小时的缓冲,待细胞恢复基本生长状态后,进行后续细胞实验。在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:
(一)细胞未长至 85%时,用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,若培养瓶上无特殊标注,吸去剩余培养液,只留 6-8ml 培养液继续培养。
(二)细胞已长满(达 85-95%)。即可进行传代,具体步骤如下:
1.弃去培养液,用 PBS 洗涤 1-2 次,
2.加入 1.0ml 胰酶消化液,37℃消化,显微镜下观察细胞消化情况,若细胞回缩变圆、透亮、轻拍甁壁呈流沙样脱落,则迅速拿回操作台,加入双倍的含 10%血清的完全培养液,终止消化并轻轻吹打细胞,使其变成单细胞悬液,
3.将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min,弃上清,轻弹管底,将细胞弹散,
4.加入新鲜培养液重悬细胞,进行传代、冻存,
5.如果没有特别说明,建议收到细胞后的第一次传代比例为 1:2。
MSC猪骨髓间质干细胞,常见问题及解决方法:
1、观察细胞密度最好用(4X物镜)低倍镜观察,以便正确的判断细胞密度;观察细胞形态请用(10X 或 20X)高倍镜观察;
2、瓶中运输的培养液不能重复使用,请换新鲜培养液培养;
3、有些细胞贴壁不牢,如发现贴壁细胞有脱落,可离心重悬后接种到新瓶内;
4、收到细胞后,若发现培养瓶破损、漏液及细胞污染,请及时与我们联系。
5、培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。
6、细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2 小时后观察,
7、
如细胞大部分又贴回瓶底表明细胞活力正常剩余漂浮的细胞可以去留 8-10m培养液培养观察,细胞生长至汇合度 85-95%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁, 将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我 们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。
8、细胞消化铺板,细胞死亡较多。 第一消化时间掌控好切勿消化过度,第二终止要完全(以T25瓶为例,加1ml胰酶用5ml完全培养基终止),第三控制吹打次数和力度,避免损伤。
我公司代理销售ATCC来源,sciencell来源,上海细胞库来源等细胞销售,另我公司有自建细胞库,生产培养各类细胞系,采用灌注法制备各种原代细胞。
欢迎新老客户咨询订购:MSC猪骨髓间质干细胞

 
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