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酵母双杂交筛选服务

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2021-06-10 17:35

安诺伦(北京)生物科技有限公司

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安诺伦(北京)生物科技有限公司
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产品属性
提供商 艾柏森(北京)生物科技有限公司
产品说明

酵母双杂交筛选服务

 

       蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础,研究蛋白间相互作用的一种有效技术手段。转录活化蛋白可以和DNA上特异的序列结合而启动相应基因的转录反应。这种DNA结合与转录激活的功能是由其上两个相互独立的结构域,即DNA结合结构域(Binding Domain, BD)和转录活化结构域(Activation Domain,AD)共同完成的。

       以Gal4系统为例,BD和AD分别由Gal4蛋白上不同的两个结构域(1-147aa与768-881aa)构成。在利用GAL4系统筛选cDNA文库或研究蛋白间的相互作用时,DNA结合结构域与靶蛋白即"诱饵"相结合,转录活化结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合。一般情况下,单独的BD可以与GAL4上游活化序列(GAL UAS)结合但不能引起转录,单独的AD则不能与GAL UAS结合;只有当BD与AD分别表达的融合蛋白由于相互作用而导致两者在空间上相互靠近时,BD与AD才能与GAL UAS结合并且引起报道基因的转录,从而激活下游报告基因,通过这一系列实验来验证两个蛋白之间的相互作用。


艾柏森生物提供如下服务内容:

酵母双杂交文库的构建:


1. 总RNA提取及mRNA纯化;
2. SMART技术合成cDNA一链,LD-PCR合成双链cDNA;          
3. 双链cDNA的纯化;      
4. 转化AH109酵母感受态细胞;          
5. 收集转化子及检测文库质量。

酵母双杂交诱饵载体的构建:

克隆cDNA全长序列,构建包含目的基因的PGBKT7诱饵载体,转化Y187酵母菌株。

酵母双杂交筛选及鉴定

您需要提供以下材料:


1. 新鲜组织材料、冻存材料或高质量RNA、诱饵基因的模板。
2. 尽可能全面的实验相关信息。

您将获得以下结果:

构建好的双杂交文库甘油菌:

1. 文库容量≥106
2. 文库滴度≥107cfu/ml;
3. 插入片段平均大于1kb(不同物种略有差别);
4. 减低高丰度表达基因10-100倍。
酵母双杂交筛选得到的阳性克隆
实验过程报告及相关数据图片

服务周期:

文库构建1个月
文库筛选1-2个月

网址:

       http://www.abiocenter.com/h-col-218.html

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