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上海韵泰信息科技有限公司
大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA检测试剂盒
大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA检测试剂盒
价 格:
¥1000
品 牌:
韵泰
产 地:
上海
最新更新日期:
2021-06-09 19:51
我要询单
上海韵泰信息科技有限公司
我要认领
公司:
上海韵泰信息科技有限公司
联系人:
程浩
联系电话:
18217555725 4006600837
联系邮箱:
1452876875@qq.com
QQ:
2284471916
产品属性
数量
>10
供应商
上海韵泰信息科技有限公司
检测限
详见说明书
检测方法
竞争法、夹心法、一步法、间接法
应用
科研实验,严禁用于临床诊断
适应物种
人、鼠、兔、猪、犬等动植物
标记物
详见说明书
样本
血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本
规格
48T
产品说明
大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA) Elisa检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)使用说明书
仅供科研实验研究使用,严禁用于临床诊断
!
l本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中
大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)
。
l有效期:
6
个月
l保存条件:
2-8
℃
[
实验原理
]
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(
ELISA
)。往预先包被
大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)
捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、
HRP
标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物
TMB
显色,
TMB
在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的
大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)
呈正相关。用酶标仪在
450nm
波长下测定吸光度(
OD
值),计算样品浓度。
[
样本处理及要求
]
1.
血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置
2
小时或
4
℃过夜,然后
1000
×
g
离心
20
分钟,取上清即可,或将上清置于
-20
℃或
-80
℃保存,但应避免反复冻融。
2.
血浆:用
EDTA
或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的
30
分钟内于
2-8
℃
1000
×
g
离心
15
分钟,取上清即可检测,或将上清置于
-20
℃或
-80
℃保存,但应避免反复冻融。
3.
组织匀浆:用预冷的
PBS (0.01M, pH=7.4)
冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的
PBS
(一般按
1:9
的重量体积比,比如
1g
的组织样品对应
9mL
的
PBS
,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在
PBS
中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于
5000
×
g
离心
5~10
分钟,取上清检测。
4.
细胞培养物上清或其它生物标本:请
1000
×
g
离心
20
分钟,取上清即可检测,或将上清置于
-20
℃或
-80
℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
[
需要而未提供的试剂和器材
]
1.
酶标仪(
450nm
)
2.
高精度加样器及枪头:
0.5-10uL
、
2-20uL
、
20-200uL
、
200-1000uL
3.37
℃恒温箱
4.
蒸馏水或去离子水
[
试剂盒组成
]
备注:
1.
标准品浓度依次为:
12
、
6
、
3
、
1.5
、
0.75
、
0.375 ng/mL
2.
经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取
50
μ
L
样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
[
注意事项
]
1
、
试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2
、
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3
、
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4
、
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物
A
、
B
液时,避免使用带金属部分的加样器。
5
、
使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6
、
洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7
、
底物
A
应挥发,避免长时间打开盖子。底物
B
对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取
OD
值。
8
、
加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9
、
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
[
试剂准备
]
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20
×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按
1
:
20
稀释,即
1
份
20
×洗涤缓冲液加
19
份蒸馏水。
[
操作步骤
]
1
、
使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2
、
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液
1
:
1
稀释后加入
50ul
于反应孔内。
3
、
加入稀释好后的标准品
50ul
于反应孔、加入待测样品
50ul
于反应孔内。立即加入
50ul
的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,
37
℃温育
1
小时。
4
、
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡
30
秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作
3
次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5
、
每孔加入
80ul
的亲和链酶素
-HRP
,轻轻振荡混匀,
37
℃温育
30
分钟。
6
、
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡
30
秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作
3
次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7
、
每孔加入底物
A
、
B
各
50ul
,轻轻振荡混匀,
37
℃温育
10
分钟。避免光照。
8
、
取出酶标板,迅速加入
50ul
终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9
、
在
450nm
波长处测定各孔的
OD
值。
[
实验结果计算
]
以所测标准品的
OD
值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的
OD
值代入方程,计算出样品的浓度。
[
试剂盒性能
]
1.
检测范围:
0.375 ng/mL
–
12 ng/mL
。
2.
灵敏度:最低检测浓度小于
0.1 ng/mL
。
3.
特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.
重复性:板内变异系数小于
10%
,板间变异系数小于
15%
。
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