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小鼠细胞色素P4502E1(CYP2E1)ELISA

¥1 - 4999
HEGUO
进口/国产
2021-06-04 13:33

上海吉耳生物科技服务有限公司

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上海吉耳生物科技服务有限公司
李志伟
18019155116
2380405346@qq.com
2380405346
产品属性
数量 大量
供应商 上海赫果生物科技有限公司
检测限 6个月
检测方法 酶联免疫法
应用 仅供科研用
适应物种 其它
标记物 详询
样本 其它
规格 96T/48T
产品说明
详细说明书欢迎来电咨询!试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中ELISA的含量。实验原理:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被ELISA捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ELISA呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。 试剂盒组成:试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 备注微孔酶标板 12孔*4条 12孔*8条 2-8℃保存标准品 0.3ml*6管 0.3ml*6管 2-8℃保存样本稀释液 6mL 3mL 2-8℃保存检测抗体-HRP 10mL 5mL 2-8℃保存20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 2-8℃保存底物B 6mL 6mL 2-8℃保存终止液 6mL 6mL 2-8℃保存封板膜 2张 2张 无说明书 1份 1份 无自封袋 1个 1个 无 样本处理及要求:1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。4. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤:1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。 注意事项:1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。3.消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。6.在储存和温育时避免强光直接照射。7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。9.不能使用过期产品。10.如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。 需要而未提供的试剂和器材:1.酶标仪(450nm)2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱4.蒸馏水或去离子水 试剂准备:试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 实验结果计算:以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。 试剂盒性能:1. 检测范围:15 pg/mL – 480 pg/mL。2. 灵敏度:最低检测浓度小于1.0 pg/mL。3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。
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