20次 | 冷藏保存 |
作为RNA染色剂之一的RiboGreen荧光染料与样品中RNA,包括rRNA、mRNA等结合,产生荧光信号。RiboGreen技术可以检测到低达1纳克RNA的变化。RNA的微量增加引起荧光信号强度(Intensity)或相对荧光单位(RFU)的显著增加。其自发荧光(Autofluorescence)忽略不计,重复性标准差异(Standard Deviation)低,不受样品化学成分的干扰。
产品内容
HEPENGBIO染色液(Reagent A) 微升
HEPENGBIO稀释液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO标准液(Reagent C) 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液(Reagent A)和HEPENGBIO标准液(Reagent C)在-20℃冰箱里,避免反复冻融;其余的保存在4℃冰箱里,HEPENGBIO染色液(Reagent A)避免光照,有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管:用于样品操作的容器
200微升1厘米光径比色皿或黑色96孔板:用于荧光分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪:用于荧光定量分析
实验步骤
一、测定准备
1.准备好待测样品,置于冰槽里
2.设定好荧光分光光度仪:激发波长485±10nm,散发波长530±12.5nm,并置零
3.实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO染色液(Reagent A)置于冰槽里融化。然后移出xx微升HEPENGBIO稀释液(Reagent B)到新的1.5毫升离心管,加入xx微升HEPENGBIO染色液(Reagent A),混匀后,用锡纸包裹,标记为HEPENGBIO染色工作液(5次测定量),放在暗室里。然后进行下列操作。
二、构建标准曲线
1.准备好5个1.5毫升离心管,标记为1至5号管
2.分别加入xx微升HEPENGBIO稀释液(Reagent B)到每个离心管
3.移取xx微升HEPENGBIO标准液(Reagent C)到1号管,混匀
4.小心移取xx微升1号管稀释的HEPENGBIO标准液(Reagent C)到2号管,混匀
5.小心移取xx微升2号管稀释的HEPENGBIO标准液(Reagent C)到3号管,混匀
6.小心移取xx微升3号管稀释的HEPENGBIO标准液(Reagent C)到4号管,混匀
7.将1至5号管放进冰槽里备用;标准管含量见下表
管号 HEPENGBIO稀释液(Reagent B) HEPENGBIO标准液(Reagent C) 标准DNA总量
1 xx微升 xx微升 xx纳克/毫升
2 xx微升 xx微升1号管 xx纳克/毫升
3 xx微升 xx微升2号管 xx纳克/毫升
4 xx微升 xx微升3号管 xx纳克/毫升
5 xx微升 空对照 0
8.移取xx微升含有HEPENGBIO染色液(Reagent A)和HEPENGBIO稀释液(Reagent B)的HEPENGBIO染色工作液到新的比色皿
9.加入100微升上述配制的标准液
10.室温下,孵育5分钟,避免光照
11.即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
12.重复实验步骤8至11四次
13.绘制标准曲线:纵座标(Y轴)为相对荧光单位(RLU);横坐标(X轴)为DNA含量(纳克/毫升)
三、样品检测
1.移取xx微升含有HEPENGBIO染色液(Reagent A)和HEPENGBIO稀释液(Reagent B)的HEPENGBIO染色工作液到新的比色皿
2.加入100微升待测样品
3.室温下,孵育5分钟,避免光照
4.即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
5.根据标准曲线获得样品对应RNA含量(纳克/毫升)
注意事项
1.本产品为25次操作,包括标准曲线测定
2.整个操作须带手套,建议使用滤芯枪头,并格外小心,防止降解RNA
3.建议所有的操作用品属于RNA专用
4.使用新鲜配制的HEPENGBIO染色工作液,务必不要超过2小时,且注意避光
5.孵育时,避免光照
6.系统检测,标准曲线测定1次即可;如果仪器更换,则需要重新测定1次
7.如果荧光读数过高,可以相应稀释样品量
8.盐类、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖不会干扰检测
9.如果样品中含有DNA,建议使用5单位DNA酶,37℃孵育90分钟预处理
10.本公司提供系列RNA检测试剂产品