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支原体污染PCR检测试剂盒

548
炎熙生物
上海
2021-12-19 20:49

上海炎熙生物科技有限公司

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产品说明

支原体污染PCR检测试剂盒

PCR Detection Kit for Mycoplasma Contamination

货号

规格

Myco-P-20

20次反应

Myco-P-50

50次反应

Myco-P-100

100次反应

   

支原体污染PCR检测试剂盒,用于检测细胞培养中的支原体污染,可检测属于柔膜菌纲(Mollicutes)的支原体、脲原体、无胆甾支原体、螺原体、虫原体、中间原体等超过一百种,与柔膜菌纲以外的其他微生物没有特异性反应。

支原体是一种直径约为0.1-0.3 μm、无细胞壁的原核生物,具有变形能力,属于柔膜菌纲,常被用作柔膜菌纲的统称。支原体是最小的具有完整细胞结构的生物,可透过常见过滤膜(0.22-0.45 μm),因此常规的无菌过滤方法不能将其去除,靶向细胞壁的抗生素也对支原体无效。支原体种类繁多,通常为寄生性或腐生性,有些种类可作为正常共生菌存在,有些种类具有致病性,还有一些种类具有细胞侵入性。

支原体污染是基础研究和工业生产中一个很常见的问题,据报导,有5-35%的细胞株受到污染;一些实验室由于对此不够重视,实际上可能有高达80%以上的细胞株发生支原体污染。支原体在光学显微镜下不可见,对培养基的需求有限,一般不会引起培养物混浊,因此细胞被支原体污染一般难以察觉。支原体污染能消耗营养物,促进代谢积累,导致pH改变,诱导或抑制细胞因子表达,并改变培养细胞的代谢、增殖特征及形态。由于支原体污染能影响几乎每一个细胞参数,所以很多研究都强调常规检测正在培养的细胞,以确保观察到的结果不被支原体污染所损害。

目前已知的支原体种类约200种,污染细胞培养物的支原体种类有20多种。其中95%的污染是由五种支原体引起:精氨酸支原体(Mycoplasma arginini),发酵支原体(Mycoplasma fermentans),猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis),口腔支原体(Mycoplasma orale)和莱氏无胆甾原体(Acholeplasma laidlawii)。精氨酸支原体和莱氏无胆甾原体为牛源性,主要由牛血清带入;猪鼻支原体主要由胰酶(通常来源于猪)带入;发酵支原体和口腔支原体为人源性,主要由实验操作人员带入,人源性的支原体污染还包括唾液支原体和人型支原体。原代细胞的支原体污染占比不到1%,但是种类最多,已知有17种支原体,主要为鼠、禽和犬来源的支原体,如鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum)、关节炎支原体(Mycoplasma arthritidis)、肺支原体(Mycoplasma pulmonis)、犬支原体(Mycoplasma canis)等,一般是从原始的动物组织中带入进来,因此种类比较多,并且有不确定性。欧洲药典(EUROPEAN PHARMACOPOEIA2.6.7指定了六种需检测的支原体:莱氏无胆甾原体,鸡毒支原体,猪鼻支原体,口腔支原体,肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)和滑液支原体(Mycoplasma synoviae)。由上述内容可知,引起细胞污染的支原体种类较为繁杂,并且可能存在未知种类,因此使用支原体通用性PCR引物更适合检测支原体污染的需要,可以避免使用物种特异性引物可能导致的漏检情况。

目前美国、欧洲、日本的药典仍然推荐体外培养法作为检测支原体污染的金标准。培养法通过使用选择性培养基,可以达到很强的特异性,并且有很高的灵敏度,但是其缺点在于操作比较繁琐,且耗时较长,完成一个完整的检测需28天之久。对于大多数实验而言,这是一个不可承受的时间成本。PCR检测由于其特异性强、灵敏度高,且快速的特点,成为培养法的良好替代方案,正逐渐被世界各国所接受。

本试剂盒采用支原体通用性引物,可检测上述提及的全部支原体,最低检测极限(LOD100%检出时的最低模板浓度)为反应液中10个支原体基因组,能在23小时内获得可靠的结果,是一种灵敏度高、特异性强、快速的检测支原体污染的方法,具有以下特点: ①特异性引物是针对高度保守的支原体16S rRNA序列设计的,可用于检测非常广泛的支原体种类,不受真核细胞或细菌DNA干扰。经本试剂盒测试的支原体菌株涵盖了所有常见的支原体污染种类; ②灵敏度极高,最低检测极限仅需10个拷贝的支原体基因组; ③阳性对照所用引物与支原体检测相同,可帮助判断假阴性现象,避免假阴性导致的误判; ④包含PCR反应所需的所有成分,只需进行一次PCR反应,降低了交叉污染的几率,使用方便。

由于支原体污染比较隐蔽,所以建议给细胞定期做支原体检测,以免在未察觉的情况下给您的实验造成影响。可供参考的做法是:在新细胞进入实验室时,以及细胞冻存入库前,都应该做一下支原体检测,平时每三个月常规检测一次。

如发现支原体污染,可用我公司的支原体清除剂进行清除。支原体清除剂采用双重杀菌机制,不易耐药。

本产品仅供科学研究使用。

我司可提供数十种支原体的种类鉴定和检测,详情请咨询我司客服。

支原体名称

主要宿主

支原体名称

主要宿主

支原体污染

细胞培养物

猪肺炎支原体

猪鼻支原体

鸡毒支原体

猪滑液支原体

滑液支原体

絮状支原体

衣阿华支原体

鸟类

猪支原体

火鸡支原体

火鸡

羊附红细胞体

关节炎支原体

无乳支原体

肺支原体

山羊支原体山羊肺炎亚种

生殖支原体

结膜支原体

人形支原体

绵羊肺炎支原体

穿透支原体

腐败支原体

肺炎支原体

丝状支原体属(通用)

羊,牛

唾液支原体

莱氏无胆甾支原体

羊,牛

人类脲原体

丝状支原体丝状亚种

解脲脲原体

Mycolasma leachii

微小脲原体

维容氏支原体

犬支原体

牛生殖道支原体

爱德华支原体

差异脲原体

猫血支原体

牛支原体

Candidatus Mycoplasma haemominutum

嗜血支原体通用

各种哺乳动物血液

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