找化学品上960化工网!
960化工网

Ph.D.-7 噬菌体展示肽库试剂盒

询价
2021-07-26 10:04

NEB(北京)

我要认领
NEB(北京)
NEB(北京)
400-811-2220
info@neb-china.com
产品属性
货号 #E8100S
数量
规格 10 Panning Experiments
产品说明






相关产品及可单独出售组分
相关产品:                                                                                                                                                                         Ph.D. -12™ 试剂盒
10 Panning Experiments
#E8110S              ¥4,369
Ph.D. -C7C™试剂盒
10 Panning Experiments
#E8120S              ¥5,139
单独出售的产品:
Ph.D.-7™ Library
50 Panning Experiments
#E8102L            ¥17,469
Ph.D.-12™ Library
50 Panning Experiments
#E8111L           ¥17,469
Ph.D.-C7C™ Library
50 Panning Experiments
#E8121L          ¥20,509
–28 gIII 测序引物 (22-mer)
#S1258S   0.5 A260 units     ¥1,209
–96 gIII 测序引物 (20-mer)
#S1259S   0.5 A260 units     ¥1,209


Ph.D.试剂盒组成
♦ 10次独立淘选实验的足量肽库,~2X 109种不同序列文库

♦ –28 gIII测序引物(100 pmol)

♦ –96 gIII测序引物(100 pmol)

♦ E. coli宿主菌ER2738

♦ 对照实验靶分子(链霉亲和素)和洗脱剂(生物素)

♦ 详细使用手册


概述
噬菌体展示是一种体外筛选技术。它可以将一系列多肽或蛋白质文库展示在噬菌体颗粒的外部,而编码这些蛋白的 DNA 则位于病毒颗粒内部(1-3)。利用展示蛋白与其编码 DNA 之间的这种物理联系,我们可以通过一种简单的称为“生物淘选”的体外筛选方法(4),快速筛选出给定靶分子(抗体、酶、细胞表面受体等)的亲和配体。最简单的淘选方法是(见图1):将展示不同多肽的噬菌体文库与固定在平板或小珠上的靶分子孵育,先洗去未结合的噬菌体,而后洗脱特异性结合的噬菌体。扩增洗脱下的噬菌体。重复上述结合洗脱过程,使展示了与靶分子结合的多肽序列的噬菌体分子富集。经过 3-4 轮筛选后,通过 DNA 测序或 ELISA 鉴定分子克隆。
NEB 提供 3 种随机肽库和供自制肽库所需的 M13KE克隆展示载体。这 3 种肽库包括 7 肽库(Ph.D.-7),12 肽库(Ph.D.-12)和受约束于二硫键的环 7 肽库(Ph.D.-C7C)。Ph.D.-C7C 随机肽库所展示的多肽两侧各加了一个半胱氨酸。噬菌体组装时经过氧化,形成环化的多肽。所有肽库的容量超过 20 亿个克隆。上述 3 种肽库表达的随机肽均在噬菌体次要包膜蛋白 pIII 的 N 端,故每一个病毒粒子可以表达 5 个拷贝。Ph.D.-7 和 Ph.D.-12 肽库表达的展示肽就是展示肽本身,不含有其它额外氨基酸,但是 Ph.D.-C7C 表达的展示肽前含有 Ala-Cys。所有的肽库在展示肽和 pIII之间存在连接肽段(Gly-Gly-Gly-Ser)。
展示在噬菌体表面的随机肽库已被应用于多种领域,包括绘制抗原表位图谱(图2)、研究蛋白质与蛋白质相互作用及酶抑制剂,并且还用于发现 GroEL、HIV、半导体表面、小分子荧光团和药物的肽配基。通过对纯化的受体和完整细胞进行淘选,已经鉴定出了具生物活性的受体配基。通过体外淘选分离出来的具有细胞特异性的靶多肽,已成功地运用于该细胞基因的传递。应用本系统,也能鉴定霉菌孢子和细菌细胞的配基,如:在体内、外均可特异抑制炭疽霉素的多肽。此外,本系统还适用于体内淘选组织特异性多肽,将噬菌体注射到活体动物体内,采集相应的器官,然后再从中分离出具有组织特异性的噬菌体。


 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
图1:噬菌体展示肽库工作原理
 


 
 
 
 
 
 
 
 
 
图2:用Ph.D.-12肽库测定抗原决定簇。
用抗内啡肽(B-*********)单克隆抗体对Ph.D.-12展示肽库进行液相淘选(10 nM 3-E7),然后用Protein A-琼脂糖(第1和第3轮淘选)或Protein G-琼脂糖(第2轮淘选)亲和捕获抗体—噬菌体复合物。结合的噬菌体用0.2 M的glycin-HCL,pH 2.2洗脱。每轮淘选所选到的结合序列与内啡肽的前1氨基酸残基序列比较列于上图内,共有序列元件用方框示出。结果清楚地显示该抗体的抗原决定簇序列落在内啡肽的前七个氨基酸残基处,并且,抗原抗体结合能大部份来自前四个残基(YGGF),在第三位的氨基酸有一定的可变性。此外,从所选12残基窗口的保守位点显示自由α-氨基酸的N端酪氨酸也是抗原决定簇的一部分。


相关产品
M13KE 噬菌体
M13KE 噬菌体来源于 Ph.D.克隆载体 M13KE 感染病毒颗粒的悬浮液(1)。载体噬菌体可作为对照在噬菌体 ELISA 中使用,也可用于噬菌体存储的浓度测定。Ph.D.多肽展示克隆系统(NEB #E8101)包含有已提取的 M13KE 噬菌体复制型。
参考文献:
(1) Noren, K.A.and Noren, C.J.(2001) Methods, 23,169–178.
#N0316S    0.04 ml      ¥1,269
抗 M13 pIII 单克隆抗体
抗 M13 pIII 单克隆抗体(鼠 IgG2a 同型物)来源于鼠骨髓瘤细胞和脾细胞融合产生的 A23 杂交瘤。BALB/c 小鼠是用 M13 衣壳蛋白 III C 端一半的肽段(259-406 残基)进行免疫。
注意:不建议用此抗体做 ELISA 来鉴定噬菌体,因为 M13 噬菌体上的抗原决定簇不易暴露。
#E8033S   0.1 ml        ¥2,649
pMAL-pIII 载体
pMAL-pIII 载体具有 M13 pIII 的前导序列,其指导经Ph.D.噬菌体展示肽库筛选到的序列转移进入表达载体。
#N8101S   10 µg          ¥949


参考文献
(1) Sidhu, S.S.et.al.(2003) Chembiochem., 4, 14–25
(2) Azzazy, H.M.and Highsmith, W.E.(2002) Clin.Biochem.,35, 425–445
(3) Rodi, D.J.et.al.(2002) Curr.Opin.Chem.Biol.,6, 92–96
(4) Parmley, S.F.and Smith, G.P.(1988) Gene, 73,305–318


平台客服 平台客服

平台在线客服