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酵母双杂交

¥100 - 1000
2021-07-21 22:53

天津科斯莫生物技术有限公司

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天津科斯莫生物技术有限公司
苗老师
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产品属性
提供商 天津科斯莫生物技术有限公司
服务名称 酵母双杂交
产品说明
酵母双杂交
原理:
酵母双杂交系统的建立基于对真核生物调控转录起始过程的认识。酵母转录因子GAL4含两个结构域:DNA结合功能域和转录激活结构域,前者可识别DNA上的特异序列,并使转录激活结构域定位于所调节基因的上游,后者同转录复合体的其他成分作用,启动相应基因的转录。将编码DNA结合功能域的基因与已知诱饵蛋白质基因构建在同一个表达载体上,在酵母中表达两者的融合蛋白,将编码DNA转录激活域的基因和cDNA文库的基因构建在AD—LIBRARY表达载体上,同时将上述两种载体转化改造后的酵母。当两种载体所表达的融合蛋白能够相互作用时,功能重建的反式作用因子能够激活酵母基因组中的报告基因,从而通过功能互补和显色反应筛选到阳性菌落。将阳性反应的酵母菌株中的AD—LIBRARY载体提取分离出来,从而对载体中插入的文库基因进行测序和分析工作。 在以上传统的酵母双杂交系统中,蛋白之间的相互作用是在细胞核内发生的。 然而许多待研究的蛋白质是膜蛋白, 它们需定位到膜上之后才能表现正常的生物功能,因此根据需要又发展了新的双杂交系统,例如Sos蛋白介导的双杂交系统, 也被称为Sos救活系统(Sos recruitment system),来弥补传统系统的缺陷。
 
实验流程:
目前我们可提供适用于浆蛋白、核蛋白及膜蛋白酵母双杂交实验服务的两套系统,包括:Clontech GAL4-based two-hybrid system 适用于诱饵蛋白为浆蛋白、核蛋白 ;Stratagene Cytotrap Psos system 适用于诱饵蛋白为膜蛋白。
具体服务内容包括:
1. 蛋白质两两之间相互作用的实验
内容包括:
1). 基因克隆的获得及DNA测序检验;
2). 基因的酵母双杂交载体构建及其DNA测序检验;;
3). 每个基因克隆的酵母双杂交自激活检验;
4). 酵母细胞内的相互作用验证
2. 蛋白质与文库相互作用的实验
内容包括:
1). 诱饵基因克隆的获得及DNA测序检验;
2). 诱饵基因的酵母双杂交载体构建及其DNA测序检验;
3). 诱饵基因的酵母双杂交自激活检验;
4). 酵母双杂交文库筛选;
5). 酵母细胞内的相互作用验证(酵母回转验证);
6). 阳性克隆DNA序列测定;
 
 
相关要求(客户提供):
1. 含有诱饵基因片段的质粒或菌株;
2. 用于筛选的文库质粒或菌株
 
最终结果:
1. 构建得到的诱饵质粒;
2. 自激活及WB检测诱饵基因表达结果;
3. 筛到的相互作用阳性克隆DNA和菌株实物;
4. 具体试验流程(包括:实验步骤;主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号;试剂厂家、批号));
5. 原始实验图片及数据。
 
天津科斯莫生物科技有限公司:
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科斯莫生物相关服务:
       MicroRNA相关服务、siRNA干扰、课题整体外包服务、基因克隆服务、慢病毒包装服务、腺病毒服务、稳定细胞株筛选服务、蛋白表达服务、抗体制备服务、DNA与蛋白相互作用研究、噬菌体展示技术服务、cDNA文库构建、干细胞研究、基金申请、标书撰写、专利申请、课题设计等
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