♦ 除去 DNA 或 RNA 分子的 3' 或 5' 突出末端,形成可以用连接酶连接的平齐末端 ♦ 构建转录图谱 ♦ 切割发夹结构中的 loop 环 ♦ 从基因组 DNA 中切除基因编码序列 ♦ 产生新的限制性酶切位点(如图) |
A) 分子量标准(λDNA/HindIII消化) B) M13mp8(超螺旋形式) C) M13mp8/NcoI消化 D) M13mp8/HindIII消化 E) 绿豆核酸酶处理D泳道产物 F) E泳道产物加入T4 DNA连接酶 G) NcoI消化F泳道产物 H) HindIII消化F泳道产物 |
概述 本品是一种单链DNA或RNA特异性的内切酶,可以从DNA或RNA分子的末端降解单链突出粘端,产生可连接的平末端。 |
来源 绿豆芽。 |
反应条件 1X 绿豆核酸酶反应缓冲液 [50 mM NaAc(pH 5.0 @ 25 ℃),30 mM NaCl,1 mM ZnSO4],30 ℃ 温育。在NEBuffers 1、2、4 中也有活性。 |
质保声明 无双链外切酶污染。 |
单位定义 1 单位指 30 ℃ 条件下,1 分钟产生 1 μg 酸溶性总核苷酸所需要的酶量。 |
活性检测条件 1X 绿豆核酸酶反应缓冲液,以0.5 mg/ml 变性的小牛胸腺DNA作底物。 |
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浓度 10,000 units/ml |
贮存条件 10 mM NaAc (pH 5.0 @ 25°C), 0.1 mM ZnAc, 1 mM cysteine, 0.001% Triton-X 100 和 50% 甘油。-20°C 贮存。 |
使用注意 不要尝试热失活。在该酶热失活前,DNA 会发生“呼吸”作用,从而导致降解。 |
参考文献 (1) Kowalski, D. et al. (1976) Biochemistry, 15, 4457–4463. (2) McCutchan, T.F. et al. (1984) Science, 225, 626–628. |
产生新的限制性酶切位点(见图) M13mp8 polylinker克隆区所含序列: 5´...CCAAGCTTGG...3´ 3´...GGTTCGAACC...5´ 用HindIII进行消化 5´...CCA AGCTTGG...3´ 3´...GGTTCGA ACC...5´ 加入绿豆核酸酶(除去5´突出端) 5´...CCA TGG...3´ 3´...GGT ACC...5´ 加T4 DNA连接酶 5´...CCATGG...3´ 3´...GGTACC...5´ 产生新的NcoI(NEB #R0193)酶切位点 |