单个b细胞抗体制备技术原理：

单个B细胞抗体制备技术是近年来新发展的一种快速制备单克隆抗体的技术。其依据是每个B细胞只含有一对功能性的重链和轻链，每个B细胞只产生一种特异性抗体的特性，可以直接从单个B细胞中扩增抗体基因获得单克隆抗体。该方法具有速度快、通量高、以及抗体重轻链可变区天然配对的优势，是目前新型、高效的抗体筛选方法之一。义翘神州可提供一站式的单B细胞抗体制备服务，包括从免疫原制备到单个B细胞分选、鉴定、及抗体生产等步骤。

单B细胞抗体发现的工作流程：

1）单个B细胞的分离

从外周血或淋巴组织中分离单B细胞，有随机分离和抗原特异性分离两种方式。随机B细胞分离，可通过显微操作、激光捕获显微切割和荧光激活细胞分选（FACS）等进行细胞挑选。抗原特异性分离可通过抗原包被磁珠、多参数FACS的荧光素标记抗原、溶血斑块实验和荧光焦点法等方法进行抗原特异性B细胞的筛选。

利用FACS技术，可以根据特定细胞表面标志物的表达模式，明确区分待分选B细胞的发育和分化阶段，几乎任何阶段的B细胞都可以分选。为了有效获得特异性抗体，必须评估供体的免疫应答，例如，在单细胞分离之前，使用酶联免疫斑点技术（ELISPOT）测定外周血中抗体特异性细胞（ASC）的丰度，从而选择含抗原特异性抗体浓度较高的血样进行后续抗体制备。

2）单B细胞抗体的测序和克隆

通常在96孔板上进行单细胞的cDNA合成。全长Ig基因转录产物通过巢式或半巢式RT-PCR进行扩增。通常情况下，对抗体重链轻链可变区不同前导序列设计前向引物的混合物，反向引物特异性互补于抗体恒定区。某些情况下，如果分离和扩增不同同种型的抗体，反向引物则是特异性互补于各种同种型抗体恒定区的混合物。表达载体可直接转染至哺乳动物细胞中，用于单克隆抗体的体外表达。

3）抗体的表达和筛选

鉴定抗体或片段的抗原特异性和生物活性之前，需将携带有抗体基因的表达载体在相应系统中表达。最简单和最常见表达系统是原核系统（例如大肠杆菌），而哺乳动物细胞系统（例如HEK 293、CHO细胞）更有利于抗体的翻译后修饰，主要是瞬时表达或稳定表达。在E. coli中，通常抗体基因表达为抗原结合片段（Fab）的形式，而在哺乳动物细胞中，以完整的IgG形式表达。

单个B细胞抗体制备服务内容大致是：

①免疫及血清效价检测

②流式分选抗原特异性记忆B细胞

③单个B细胞培养及ELISA鉴定

④单个B细胞可变区扩增

⑤单抗快速表达及ELISA鉴定

⑥单抗表达及功能鉴定

单个B细胞技术作为一类快速制备单克隆抗体的技术，具有高通量、高效率、高特异性等优点，所制备的抗体保留了丰富的基因多样性和轻重链可变区的天然配对，具有更广泛的应用前景，尤其是在快速应对病原微生物抗体开发方面独具优势，如新冠病毒中和抗体的筛选。

详情可以关注：单个B细胞抗体服务：https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service