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蛋白表达是什么意思?蛋白表达系统可分为哪几大类?

2023年05月09日 14:04   生物.医药.天然产物  

北京义翘神州科技股份有限公司 发布 访问商铺

关键词:蛋白表达

蛋白表达是什么意思?

 

蛋白表达涉及遗传信息从DNA流向RNA的过程,称为转录,并翻译核酸携带的信息,以组成蛋白的氨基酸序列,最后一个过程称为翻译。换言之,蛋白表达过程包括基因表达和蛋白合成步骤。



 

蛋白表达纯化的整个流程?

 

分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分离、细分离三步。

 

01前处理

分离纯化某种蛋白质,首先要把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来并保持原来的天然状态,不丢失生物活性。

 

02粗分离

当蛋白质提取液(有时还杂有核酸、多糖之类)获得后,选用一套适当的方法,将所要的蛋白与其他杂蛋白分离开来。一般这一步的分离用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。这些方法的特点是简便、处理量大,既能除去大量杂质,又能浓缩蛋白溶液。有些蛋白提取液体积较大,又不适于用沉淀或盐析法浓缩,则可采用超过滤、凝胶过滤、冷冻真空干燥或其他方法进行浓缩。

 

03细分离

样品经粗分级分离以后,一般体积较小,杂蛋白大部分已被除去。进一步纯化,一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳法,包括区带电泳、等电点聚焦等作为最后的纯化步骤。用于细分级分离的方法一般规模较小,但分辨率很高。

 

结晶是蛋白质分离纯化的最后步骤。尽管结晶过程并不能保证蛋白一定是均一的,但是只有某种蛋白在溶液中数量上占有优势时才能形成结晶。结晶过程本身也伴随着一定程度的纯化,而重结晶又可除去少量夹杂的蛋白。由于结晶过程中从未发现过变性蛋白,因此蛋白的结晶不仅是纯度的一个标志,也是断定制品处于天然状态的有力指标。

 

蛋白表达系统可分为哪几大类?

 

 1、原核表达系统

指的是通过基因技术,将外源目的基因通过构建表达载体并导入表达菌株的方式,让其在特定的原核生物中进行表达的方式。主要以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌为载体;

优点:遗传背景清晰、操作简单、时间时间段且成本低,容易实现大规模生产;

缺点:分泌量少且大分子量蛋白表达困难;

2、酵母表达系统

一般采用毕赤酵母或是酿酒酵母为宿主来进行表达,兼具原核和真核表达系统的特性;

优点:表达量高、时间短、成本低、培养条件简单;

缺点:表达量不可控且产物容易降解;

3、昆虫表达系统

也叫杆状病毒昆虫表达系统,是一种以昆虫杆状病毒为外源基因载体,昆虫和昆虫细胞为受体的表达系统;

优点:表达速度快、无内毒素、适合毒性蛋白表达;

缺点:生产周期长、成本高、部分蛋白容易出现降解的情况;

4、哺乳动物表达系统

是一种以哺乳动物表作为宿主细胞进行蛋白表达的方式;

优点:表达迅速、蛋白活性高、表达后可修饰;

缺点:生产周期长、成本高且生产速度较慢;

总的来说,如上四种表达方式各具特点,同时也各自存在不足之处。所以,我们在日常选择蛋白表达系统时候,需要结合具体情况来进行选择,只有选择了合适的表达系统才能在更大程度上减少表达的时间和资金投入。义翘神州为您提供重组蛋白表达服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。蛋白表达服务:https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service

 

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