破解细胞生长慢,这几个关键点你注意了吗?
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在进行细胞实验的过程中,相信大家都有这样的经历:实验规划恨不得精细到每小时,甚至连哪天出数据都预估好了。
理想很丰满,现实往往很骨感!
“隔壁王师兄的细胞都能传代了,我的这细胞,咋长得这么慢呢?”
所以今天,我们就来聊聊,细胞生长缓慢(异常情况的慢,一些特殊细胞不在讨论范围内)的可能原因。
原因很复杂,可以总结为以下几点,如果小伙伴们有更多观点,欢迎补充
细胞可能存在污染
各类细胞污染
都有可能导致细胞生长缓慢
如果培养体系,不小心被细菌、真菌、支原体污染,都会导致细胞因缺乏营养而出现生长缓慢的现象。
细菌污染发展迅速,一般会出现培养基浑浊、变黄的现象;真菌污染最好辨认,显微镜下可见丝状菌体(有些甚至严重到肉眼可见);而支原体污染往往防不胜防,显微镜下也很难捕捉到它的身影。支原体污染的典型特征是培养基提前变黄、细胞生长受阻,后期细胞大量死亡等。
因此,如果细胞生长缓慢,首先要考虑细胞是否存在污染。并做相应的处理。具体处理方法见以下几篇文章:
细胞培养中的污染监控与检测——细菌
细胞培养中的污染监控与检测——真菌
细胞培养中的污染监控与检测——支原体
培养体系有瑕疵
没有根据细胞特性调整培养体系
细胞的体外培养,依赖于完全培养基的支持与保护。有些小伙伴拿到一株陌生的细胞,没有将培养体系研究清楚就开始实验,由于培养环境的改变,导致细胞一时无法适应,而出现生长受阻甚至停滞的状态。
当我们排除了细胞污染的情况后,就要考虑培养体系是否合理了:培养基种类、品牌是否进行过更换?血清类型是否用错等等,尽可能保证与原培养条件一致,如果要更换,也要循序渐进。
细胞初始状态较差
细胞长得慢
很可能不是你的锅
可能最一开始复苏的细胞,就被污染/活力不足。因此,建议大家再复苏一管同种细胞(最好不是同批次冻存的),与现有细胞进行比较,观察长势。
本期内容先暂停到这里,欲知其他原因,且听下回分解!
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