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经典案例|普健大肠杆菌表达系统

2022年11月24日 09:35   生物.医药.天然产物  

普健生物(武汉)科技有限公司 发布 访问商铺

关键词:微生物;大肠杆菌;蛋白表达;

重组蛋白表达系列二

大肠杆菌表达系统

展示案例:E.coli Expression System

在普健生物所拥有的五大蛋白表达系统中,众所周知的基础又经济的系统当属原核的大肠杆菌表达系统了。

大肠杆菌表达系统因其代谢途径和基因表达调控机制研究透彻、培养周期短、目标基因表达水平高且遗传背景清楚,是目前市面上应用最广泛的表达系统。

当然大肠杆菌君,优点多多,缺点也明显--就是让广大原核科研汪谈之色变的包涵体。

而普健生物作为一家专注于蛋白表达技术的研究型高新技术企业,通过对E.coli表达系统的丰富经验以及熟练掌握,在E.coli系统上的蛋白可溶性表达成功率达到90%以上。

空口无凭,下面小编就给大家分享两个案例:

 

CASE  1——PNGase F

PNGase F(肽 N-糖苷酶 F)是一种酰氨酶,可在 N-连糖蛋白的高甘露糖、杂合和复合寡糖部分最内侧的 N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨残基之间进行切割。PNGase F几乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有的 N-连接糖(X=H 或寡糖),不会去除常见植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 岩藻糖连接的寡糖。

PNGase F采用普健大肠杆菌表达系统成功可溶表达,产量高达107.1mg/L,纯度>95%,经检验活性较高。


P.S  PNGase F酶有现货哦,欢迎至普健生物官网留言订购。

以图为鉴

Test Report

01

Expression test


PNGase F protein have expressed in strain No.1 and strain No.2 , the most optimal expression yield for PNGase F in native is strain No.1 , 16℃.

 

02

Fermentation and Purification

1L scale up purification test

Target protein purification profile

 

03

SEC AKTA purification

SEC AKTA purification result part A

 

 

04

Final QC 

SDS-PAGE of fragment of SEC AKTA purification 
 

CASE 2——Co-expression CKM/CKB

肌酸激酶(CK)是一个重要的能量调节酶,可逆催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应,CK广泛分布于心脏肌肉的包浆内。CK有M和B两个亚基组成,以此分为三个最基本的同工酶:CKMM、CKMB、CKBB。目前在临床上应用最多的是将CK与CKMB结合,用于急性心肌梗塞的早期诊断;此外,CKBB蛋白也被应用在急性呼吸道感染、病毒性腹泻等疾病的基础研究中。

CKM/CKB采用普健大肠杆菌共表达系统实现可溶表达,并分别纯化出有活性的CKMB和CKBB两种酶,纯度>95%。


P.S  该蛋白普健也有现货哦,欢迎至普健生物官网留言订购。
 

01

Purification Test(Mixture of CKBB and CKMB)


Target protein purification profile 

 

02

Purification Test(CKMB)

Target protein purification profile 

 

03

Final Product

 

普健生物大肠杆菌表达服务

 

表达载体构建

可提供多种表达载体,如pET、pGEX、pBAD、pCOLD系列等。
 

表达及纯化测试

 

大规模生产服务

 

多种表达套餐选择

基础套餐,增强套餐,高通量套餐

 

 

 

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