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多肽纯化有哪些典型的问题(1)

2022年09月21日 09:48   学术化工  

杭州固拓生物科技有限公司 发布 访问商铺

关键词:多肽

1.多肽试样在上制备柱前为何要做好预处理?有什么预处理的办法?

答:制备用到的色谱柱子因加工的样品多,比用来分析色谱柱更加容易受污染,对于需要过柱样品进行适当的预处理能够很好的延缓制备柱的使用年限。样品预处理基本方式有:萃取、过滤、离心、上预柱。

 

2.为何流动相里需要添加三氟乙酸用作离子对试剂?还有什么流动相体系或离子对试剂适用于多肽的分离纯化?

答:现阶段比较常见的流动相体系是水配乙腈,以三氟乙酸(TFA)为离子对试剂。针对不同的多肽合理选择梯度洗脱分离多肽。

添加TFA能控制洗脱液的PH,并且作为离子对试剂与多肽会协同作用,可以提高分离效果,大幅提升样品峰形。也能用作多肽分离纯化的流动相体系或离子对试剂有:醋酸体系,磷酸体系,盐酸体系,七氟丁酸等。根据调整PH也能够取得非常好的分离效果。

3.怎么选择纯化流程所使用的色谱柱填料?

答:不一样的序列其多肽理化性质及疏水性有很大的区别。大部分情况分子量<4000和亲水性多肽用C18柱分离成效zui佳。分子量>5000和疏水性强的多肽以C4柱分离成效zui佳。

C8色谱柱处于C18C4中间,他的运用效果更偏向C18;对部分特殊选择性的多肽,也可以考虑苯基柱和聚合物色谱柱。

4.在纯化环节中挑选聚合物填料的思路是什么?

答:需要使用环境温度条件进行或超过常规pH纯化时;可以使用pH规模更宽的聚合物色谱柱。其优势是在jipH环境下不能降解,能用强碱与强酸用作流动相进行分离纯化。

 

 

写到最后:

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