高通量筛选检测方法-分子篇 | MedChemExpress
■ 荧光偏振
荧光偏振是一项在高通量筛选中应用广泛的技术,适合研究不同质量分子之间的结合。荧光偏振通常与结合物质的百分比成线性比例,由此定量地测定 IC50 值。其多应用于蛋白-分子 (配体)、蛋白-蛋白相互作用,核酸杂交等方面,几乎可以应用于所有蛋白类型,包括 GPCR、核受体及酶等。
Ali Camara 团队将荧光偏振技术应用到高通量筛选中,对 FDA 上市化合物、天然产物等 9680 种活性化合物进行筛选,得到了第一个 HYPE 腺苷转移酶的小分子调节剂。
图 1. HYPE 腺苷转移酶的小分子调节剂筛选[3]
目的蛋白的表达和纯化 → 优化分析系统 → 高通量筛选 → 结果分析 → 二次筛选 → 发现了至少两种有效的 HYPE 腺苷转移酶活性调节剂
a. 首先通过高通量筛选从32914种化合物中筛选出2个化合物,b. 同时通过虚拟筛选选出 41 个相近化合物. c. 最后用DSE-FRET对43种化合物进行复测, 获得了 RelA 特异性抑制剂。
酶联免疫吸附试验是最常用的实验方法之一,可检测和定量如抗体、蛋白质和激素等物质。但该方法存在灵敏度低等缺点,可以通过减少样品体积,增加控制和吞吐量等方法优化。
氧化应激已被证实参与许多病理生理过程,而抗氧化防御系统中的几个关键酶,包括血红素加氧酶1 (HO-1)、超氧化物歧化酶 (SOD) 和谷胱甘肽s -转移酶(GST)等,主要受到Keap1和Nrf2调控,所以作用于 Keap1-Nrf2 的抑制剂被认为是治疗慢性氧化和炎症应激的重要途径。
Yan Wang 团队建立了一种新的基于酶联免疫吸附的方法,对 1500 种 FDA 批准上市化合物高通量筛选,获得了三种对 Keap1-Nrf2 蛋白相互作用抑制效果较好的小分子。
图 3. 评估化学物质对 Keap1-Nrf2 相互作用的抑制作用[12]
Keap1 蛋白用 Avi 标签标记,连接生物素。生物素化的 Keap1 通过生物素-链霉亲和素相互作用与链霉亲和素包被的板结合。Nrf2 添加到板上并被 Keap1 捕获。
图 4. 声雾电离-质谱分析联用[9]
高通量筛选有许多可用的技术,在选择检测方法时,最重要的标准是先对实验进行构思,再设计适当的筛选方法来检测。例如,在寻找某种酶的抑制剂时,可通过更加直观的分子水平的筛选方法。
两期文章中列出的检测方法虽已经可以涵盖目前发现中的大多数方法,但随着我们对潜在疾病的生物学过程的理解的深入,需要不断开发新的技术和分析方法来研究这些日益复杂的系统。
相关产品 |
MCE 收录了 11000+ 种具有明确报道的、活性已知、靶点明确的小分子化合物,包括天然产物,新型化合物,已上市化合物及处于临床期化合物等,可以用于信号通路研究,新药研发,老药新用等不同的筛选目的。 |
MCE 收录了 2300+ 个批准上市的化合物,这些化合物已经完成了广泛的临床前和临床研究,具有良好的生物活性、安全性和生物利用度。 |
MCE 收录了 2800+ 种天然产物,包括糖类和糖苷,苯丙素类,醌类,黄酮类,萜类,类固醇,生物碱,酚类,酸和醛等,天然产物化合物库是一种有用的药物开发工具。 |
MCE 可以提供 15703 种片段化合物,这些化合物均符合“类药 3 原则 (RO3)”,MCE 片段化合物库是先导化合物的重要来源。 |
MCE 老药新用化合物库包括 3500+ 种批准上市药物及临床Ⅰ期以后化合物,这些化合物已经完成了广泛的临床前和临床研究,具有良好的生物活性、安全性和生物利用度,特别适合药物新适应症的研究。 |
MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,我们不为任何个人用途提供产品和服务。
更多化合物库请参考:https://www.medchemexpress.cn/screening-libraries.html
参考文献
下滑查看更多 ↓
12. Yan Wang, Chu-Ying Xiao, Huang-Quan Lin, et al. Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for Keap1-Nrf2 interaction inhibitors identification. Redox Biol. 2020 Jul;34:101573.
- [perfemiker.cn]111-39-7|N-正丙基乙二胺|N-(n-Propyl)Ethylenediamine
- [perfemiker.cn]62-50-0|甲磺酸乙酯|ethyl methanesulfonate
- [perfemiker.cn]53-84-9|辅酶I|beta-Diphosphopyridine nucleotide
- ★【Medlife小分子化合物】α-CGRP (human)
- ★【Medlife小分子化合物】AMD 3465 hexahydrobromide
- ★【Medlife小分子化合物】Atipamezole hydrochloride
- [创赛中国]83435-58-9|BOC-D-脯氨醇|(R)-1-(Tert-Butoxycarbonyl)-2-Pyrrolidinemethanol
- [创赛中国]8002-74-2|石蜡|Paraffin Wax
- [创赛中国]9003-01-4|聚丙烯酸|Poly(acrylic acid)
- 吸附的成年兔补体物化性质和储存说明
- Rainbow荧光颗粒在生物标记物、药物递送系统中的应用