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AbMole科研-硫氧还蛋白相互作用蛋白调控NOD样受体蛋白3炎症小体的机制

2021年09月26日 09:18   生物.医药.天然产物

奥默生物技术(上海)有限公司 发布 访问商铺

关键字:Phosphatase inhibitors

AbMole精研抑制剂十年,最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是:硫氧还蛋白相互作用蛋白调控NOD样受体蛋白3炎症小体的机制。


炎症反应在DN中起着重要作用;本研究的目的是研究硫氧还蛋白相互作用蛋白 (TXNIP)/NOD 样受体蛋白 3 (NLRP3) 轴介导的 DN 中 NLRP3 炎性体激活的作用。注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。然后使用苏木精和伊红 (H&E) 染色和链霉亲和素-过氧化物酶染色分别检查肾组织形态以及 TXNIP 和 NLRP3 蛋白表达水平。此外,还应用了 RNA 干扰技术来沉默 TXNIP 基因。 TXNIP 和 NLRP3 炎症小体激活相关蛋白和 mRNA 分别通过蛋白质印迹分析和 RT-qPCR 检测。还使用酶联免疫吸附试验检测白细胞介素 (IL)-1 和 IL-18 的表达,同时使用流式细胞术检测活性氧的产生。数据显示TXNIP和NLRP3在DN大鼠肾组织中过表达,抗氧化基因水平下调。还观察到葡萄糖以时间依赖性和剂量依赖性方式促进 TXNIP 表达和 NLRP3 炎症小体的激活,从而促进炎症反应。TXNIP 基因的沉默导致 NLRP3 炎症小体激活的下调,并抑制了高糖环境中 IL-1 和 IL-18 的表达水平。此外,TXNIP的低表达促进了抗氧化基因的水平并降低了ROS水平。总之,高糖环境能够通过促进 TXNIP 的表达和 NLRP3 炎性体的激活来上调炎症因子的水平,从而参与 DN。


Phosphatase inhibitors(Abmole,M752)在Western blot实验中用于防止研究中蛋白和脂类的磷酸化状态丢失,为蛋白磷酸化提供更加全面的保护。


Figure 2. Expression levels of TXNIP and NLRP3 inflammasome‑associated proteins in renal tissue of DN rats.


进行蛋白质印迹分析以检测 TXNIP 和 NLRP3 炎症小体蛋白以及许多炎症因子的水平。 结果表明,DN组TXNIP、NLRP3、cleaved-caspase-1、IL-1和IL-18的水平显著高于对照组(P<0.05;图2A和B)。这表明高葡萄糖水平促进了 TXNIP 表达和 NLRP3 炎性体激活。


Figure 3. Antioxidant gene expression levels in DN rats.


通过蛋白质印迹分析和RT-qPCR分别检测过氧化氢酶和MnSOD的蛋白质和mRNA表达水平。 实验结果表明,与对照组相比,DN组中过氧化氢酶和MnSOD蛋白和mRNA的表达水平显著降低(P<0.01;图3A-C)。 ELISA结果还显示DN组SOD表达水平显着降低,而MDA水平显著升高(图3D和E)。这些结果表明DN大鼠肾脏的抗氧化能力降低。


Figure 4. Effects of different concentrations of glucose on TXNIP expression and the activation of NLRP3 inflammasome in HK‑2 cells.


进行蛋白质印迹分析以检测对照、HG1、HG2和HG3组的HK-2细胞中TXNIP、NLRP3、cleaved-caspase-1和caspase-1蛋白的表达水平。结果表明,随着培养基中葡萄糖浓度的增加,TXNIP、NLRP3和cleaved-caspase-1蛋白水平逐渐升高,而caspase-1蛋白水平下降(图4A和B)。 ELISA 结果还显示,随着培养基中葡萄糖浓度的升高,IL-1 和 IL-18 的分泌水平增加(图 4C 和 D)。这表明葡萄糖以剂量依赖性方式促进 TXNIP 的表达和 NLRP3 炎性体的激活,并增强炎症反应。


鸣谢:Chunmei Gu, et al. Int J Mol Med. 2019 Jun;43(6):2440-2450.

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