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细胞转染、重组蛋白、荧光素酶检测试剂盒实验 | MedChemExpress

2021年09月24日 15:43   生物.医药.天然产物

上海皓元生物医药科技有限公司 发布 访问商铺

关键字:融合标签,转染,双荧光素酶报告基因
 
 
“六合心法”第一式
 
 
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PolyFast 转染试剂 (PolyFast Transfection Reagent)

细胞转染主要将 DNA/RNA 导入真核细胞;转染方法五花八门,常见的转染方法可分为化学法、物理法和生物法。但是没有一种方法是可以通用的,所以不少研究者在实际实验过程中难免踩雷....

来!先了解一下常见的几项转染技术

图 1. 常见转染技术

 

不同转染技术都有各自明显的优缺点,是不是不知道该怎么选择啦?告诉你一个绝招吧PolyFast Transfection Reagent!其原理是当带正电荷的聚合物和带负电荷的 DNA/RNA 结合成复合物后,通过胞吞作用进入细胞,并在胞质中将核酸释放出来,完成转染。

 

图 2. 转染步骤

 

操作简单,适用性广,在体内和体外都有很高的转染效率,且对细胞几乎没有毒性,这可是转染实验中的一大法宝

 

“六合心法”第二式
 
Anti-Flag 亲和凝胶 (Anti-Flag Affinity Gel)

体外重组蛋白表达技术是较常用的蛋白分析手段,目前已渗透到生物学的各个领域,其主要流程包括载体构建表达鉴定蛋白纯化三个步骤。载体构建过程中,合适的标签蛋白可直接影响后续蛋白的表达与纯化,本心法主要针对 Flag 标签蛋白!

 
知己知彼,才能百战百胜。要想成功的将 Flag 标签蛋白纯化下来,肯定需要了解Flag 标签蛋白是什么啦
 
Flag 标签蛋白为编码 8 个氨基酸的亲水性多肽 (DYKDDDDK),可通过基因工程技术加到目的蛋白末端。形成的融合蛋白可以直接进行 Flag 亲和层析,也可以被抗 Flag 的抗体识别,也可使用肠激酶将 Flag 标签切除后得到特异性目的蛋白,因此 Flag 标签蛋白已广泛用于蛋白表达、纯化及功能研究等相关领域
 
本心法中的 Anti-Flag Affinity Gel 是由高质量的鼠源 lgG2b 单克隆抗体与琼脂糖 Sepharose 4B 共价偶联而得,具有较高的 Flag 标签蛋白结合容量,可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 Flag 标签蛋白的免疫沉淀、蛋白纯化实验。
 

图 3. Anti-Flag Affinity Gel 的组成成分

 

图 4. Anti-Flag Affinity Gel 的使用步骤 (仅供参考)

 

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“六合心法”第三式
 

双荧光素酶报告基因检测试剂盒 (Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit)

荧光素酶是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称,可催化荧光素氧化成氧化荧光素,并在此过程中发出生物荧光,可用荧光测定仪测定。这一反应体系广泛用于启动子转录活性调控和 miRNA 靶基因验证等方面的研究。

 

目前最常见的荧光素酶是萤火虫荧光素酶 (Firefly luciferase) 和海肾荧光素酶 (Renilla luciferase),前者用于荧光素酶报告基因的检测,后者则作为内参,消除细胞生长状态、数量、转染效率等差异的影响,使结果更准确
 
本心法中的 Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit 含有高纯度的 D-荧光素、腔肠素以及比例优化的反应缓冲液,可实现哺乳动物细胞双萤光素酶报告基因检测,操作简单、检测快捷、灵敏度高。
 

 

相关产品

PolyFast Transfection Reagent

高效低毒、操作简便、重复性好的转染试剂盒。可高效地对 DNA、RNA进行转染。对多种常见细胞具有高水平转染效率,对原代细胞和难转染细胞也具有较好的效果。

Anti-Flag Affinity Gel 

是一种纯化的小鼠 IgG2b 单克隆抗体,共价连接琼脂糖 Sepharose 4B。可用于大肠杆菌、酵母、昆虫和哺乳动物表达系统中表达的Flag标记蛋白的高效纯化或免疫沉淀 (IP)。

Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit

含有高纯度的 D-荧光素、腔肠素以及比例优化的反应缓冲液,实现哺乳动物细胞双萤光素酶报告基因检测。

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