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大鼠(Rat)S100B蛋白(S-100B)ELISA

2016年05月30日 10:58   化工产品  

上海晨易生物科技有限公司 发布 访问商铺

关键词: 大鼠(Rat)S100B蛋白(S-100B)ELISA

大鼠(Rat)S100B蛋白(S-100B)ELISA检测试剂盒 

试用说明书

检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验 ( ELISA ) 。 往预先包被 S100B 蛋白( S-100B ) 抗体的包被微孔中,依次加入标本 、 标准品 、 HRP 标记的检测抗体 , 经过温育并彻底洗涤 。 用底物 TMB 显色 ,TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色 , 并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 S100B 蛋白( S-100B ) 呈正相关 。 用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值 ) ,计算样品浓度。
 样品收集、处理及保存方法
1. 血清 : 使用不含热原和内毒素的试管 , 操作过程中避免任何细胞刺激 , 收集血液后 , 3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆 : EDTA 、 柠檬酸盐或肝素抗凝 。 3000 转离心 30 分钟取上清 。

3. 细胞上清液: 3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆 : 将组织加入适量生理盐水捣碎 。 3000 转离心 10 分钟取上清。
5. 保存 : 如果样本收集后不及时检测 , 请按一次用量分装 , 冻存于-20 ℃ ,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻 。
 自备物品
1. 酶标仪( 450nm )
2. 高精度加样器及枪头 : 0.5-10uL 、 2-20uL 、 20-200uL 、 200-1000uL3. 37 ℃ 恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在 2-8 ℃ ,使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中 , 密封 ( 低温干燥 ) 保存 。
3. 浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍,最终结果乘以 5 才是样本实际浓度

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
     名称                 96孔配置                        48孔配置                     备注
微孔酶标板          12 孔 × 8 条                   12 孔 × 4 条                     无
标准品                 0.3mL*6 管                      0.3mL*6 管                     无
样本稀释液               6 mL                            3 mL                             无
检测抗体 -HRP        10mL                            5mL                               无
20 × 洗涤缓冲液      25mL                          15mL                      按说明书进行稀
底物 A                      6mL                              3mL                             无
底物 B                      6mL                             3mL                              无
终止液                     6mL                              3mL                              无
封板膜                     2 张                              2 张                              无
说明书                    1 份                                1 份                             无
自封袋                   1 个                                 1 个                             无
注:标准品( S0-S5 )浓度 依次 为: 0 、 5 、 10 、 20 、 40 、 80 pg/mL
试剂的准备
20 × 洗涤缓冲液的稀释 : 蒸馏水按 1 : 20 稀释 , 即 1 份的 20 × 洗涤冲液加 19 份的蒸馏水。
 洗板方法

1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置 1min 后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板 5 次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液 350 μ L ,浸泡 1min ,洗板 5 次。
 操作步骤
1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条 , 剩余板条用自封袋密封放回 4 ℃ 。
2. 设置标准品孔和样本孔 , 标准品孔各加不同浓度的标准 品 50 μ L ;样本孔加待测样本 50 μ L 。
3. 样本孔先加 待测样本 10 μ L ,再 加样本稀释液 4 0 μ L ; 空白孔不加。
4. 除空白孔外, 标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶( HRP )标记的检测抗体 100 μ L ,用封板膜封住反应孔, 37 ℃ 水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 1min ,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5 次(也可用洗板机洗板 ) 。

6. 每孔加入底物 A 、 B 各 50 μ L , 37 ℃ 避光孵育 15min 。
7. 每孔加入终止液 50 μ L , 15min 内 , 在 450nm 波长处测定各孔 的OD 值。
 结果判断
绘制标准曲线:在 Excel 工作表中,以标准品浓度作横坐标,对 应OD 值作纵坐标 , 绘制出标准品线性回归曲线 , 按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值,大于等 于0.9900 。
2. 灵敏度:最低检测浓度小于 1.0 pg/mL 。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于 15% 。
5. 贮藏: 2-8 ℃ ,避光防潮保存。
6. 有效期: 6 个月
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或 人 体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
2. 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

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