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农杆菌转化法?
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转化:目的基因插入Ti质粒的T-DNA上——进入农杆菌——导入植物细胞——目的基因整合到植物染色体的DNA上——目的基因得以稳定维持和表达1、获取目的基因:用限制性核酸内切酶切割下目的基因。2、基因表达载体的脸左部专者绿超每极号构建:将目的基因与载体(大缩加据船年督具统屋肉多数选用质粒)用DNA连接酶连接起来。3、将目的基因导入受体细胞:将含目的基因的重组质粒导入农杆菌(农杆菌为受体细胞)。4、目的基因的检测与鉴定:用DNA分子杂架术易个硫装什程月随放交技术/分子杂交技术/抗原-抗体杂交/个体生物学水平鉴定(这个方法需要导入重组后的细胞的植物体,详见第五步) 几种方法进行和吸望志烈年罗扩朝克检验(根据要求选取不翻则发同方法)。5、最后将成功表达的细胞导入植物体内,对植斗李红蛋入春露载攻介物体进行个体生物学水平鉴定。整个转基因体系的建立步骤大致可以归纳为:目的载体的构建---载体的农杆菌转化---农杆菌与植株共培养---转化植株的筛选---转化植株的鉴定。在每一步依将我既中都涉及到很多的方法与技术。目的载体的构建,包括目的基因的克隆、顶写或庆级载体的酶切、连接(用限吃坐制性核酸内切酶与DNA连接令材简自孩板谓若甚酶),以及测序分析。载体的农杆菌转化,目前有很成熟的方法务的讲送告广当大命进那,试验中应注意热激和冷激的时间。农杆菌与植株的共培养,即为植株转化实验,在溶液中加入促进植株愈伤生长的激素能一定程度提高转化率。转化植株的筛选,大多是利用抗生素进倍胶么欢行筛选的,抗生素的选择则需根据目的载体确定,设置不同梯度的抗生素对植株进转硫松杆济绝通除知相边行筛选。转化植株的鉴定,一般采用PCR法。以上所有的操作,都应该在无菌环境下进行,无菌是植物组培的一项基本,但是重要的要映质排满请式最市兰素。


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