分离纯化基因组dna异丙醇里需要加糖原吗

纯化DNA除DNA溶液酶类蛋白质经典使用氯仿抽提或者1:1苯酚氯仿或者苯酚两种机溶剂混合使用要比使用单独种更种非效使蛋白质变性酶类失尽管苯酚效使蛋白变性能够抑制RNase性且其含polyARNA效溶剂通使用两种机溶剂同使用解决问题注意：氯仿指24:1氯仿异戊醇混合物苯酚指用0.1%羟基喹啉0.2%贝塔巯基乙醇平衡苯酚1、DNA溶液与等体积苯酚氯仿混合2、混匀直乳液状3、离3钟4、清液转移干净离管（注意要吸取间层）5、再重新用苯酚氯仿处理即重复1、2、3、46、加入等体积氯仿混匀重复2、3、47、用乙醇或者异丙醇沉淀注意：DNA片段于10Kbby gentle shaking于10Kbby vortexing于10Kb采用列步骤:a. 20 rpm 缓慢摇匀b. 使用口径枪转移DNA溶液c. 用乙醇沉淀DNAd. 氯仿除通透析透析液用冷TNE或者饱水沉淀DNA用乙醇沉淀程低温（-20摄氏度）且适价离存情况沉淀DNA该快速且收纳克级DNA1、确定DNA溶液体积2、用pH8.0水或者TE溶液调整DNA溶液价离浓度或者加入定量价离（见表）浓度终浓度Sodium acetate 醋酸钠2.5 M（pH5.2）0.25 MSodium chloride 氯化钠5.0 M0.1 MAmmonium acetate 醋酸铵10.5 M2.0 M3、混匀加入2倍体积冷水乙醇放置-20摄氏度4、般放置20-30钟片段于1 Kb或者浓度非低适延间或者放置-70摄氏度5、0摄氏度离般12000 rpm 离10钟足够片度较或者浓度较低则要延离间转速6、掉清使用吸水纸尽量吸干管溶液使用真空干燥机干燥7、用pH8.0水或者TE溶液溶解DNA沉淀说明：A. 1倍体积异丙醇通用代替2倍体积水乙醇异丙醇使用其自身特点其终体积容易1.5 ml离管进行其易挥发且特别-70摄氏度放置沉淀容易与蔗糖氯化钾等共沉淀原则使用水乙醇沉淀B. 要除盐离、机溶剂等用70%乙醇漂洗70%乙醇漂洗DNA沉淀与管壁结合较松散移清液要同加入70%乙醇要超管体积三二C. 于200 bpDNA使用乙醇沉淀非困难加入乙醇前调整溶液含0.01 M 氯化镁利于片段DNA沉淀D. 般情况纯化DNA容易复溶溶液含氯化镁或者于0.1 M 氯化钠情况DNA难溶解通使用少量低盐离浓度溶液溶解调整定盐离浓度品较难溶解于体积溶液则加入体积溶液重新用水乙醇沉淀E. 纯化RNA需要至少2.5倍体积水乙醇沉淀RNAF. 除DNA溶液三磷酸通两沉淀实现沉淀程加入终浓度2 M 醋酸铵 浓缩DNA通使用2-butanol（2丁醇）或者n-butyl alcohol（1-butanol1丁醇）浓缩DNA溶液使用两种机溶剂水部进入机相DNA及盐离等进入机相通几重复浓缩DNA溶液通待沉淀DNA品体积浓缩用水乙醇沉淀体积1、加入等体积2-butanolDNA溶液充混匀注意：加入太体积2-butanol导致水丧失DNA浓缩沉淀2、离1钟1600 g移层机相3、重复1、2步骤直所需体积4、用水饱乙醚抽提除溶液2-butanol5、使用真空抽提除乙醚注意：2-butanol抽提能除盐离盐离浓度升高通透析或者用乙醇沉淀除盐离