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合成的引物怎么溶解
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回答者:网友
◆干粉引物溶解稀释方法:
收到引物后,在开启离心管盖前在3000-4000转/分钟的转速下离心1分钟,以防开盖时引物干粉散失。引物保存在高浓度的状况下比较稳定。如果对实验的重复性要求较高,合成的OD数较大,建议分装,避免反复冻融。引物一般配制成10-100pmol/uL(umol/L)。
引物管上标有1OD 相当于多少umol 的计算结果,进行稀释时的引物加水量可以按以下公式计算:
稀释成100pmol/ul 1OD 需加水量(ul)=1OD相当于umol 数×10000
例如,您拿到的引物DNA合成报告单上标有1OD≈0.0035umol ,包装量是1OD/管,如果您希望将引物浓度定为10umol/L,那么只需用350ul无核酸酶的双蒸水将1OD的引物干粉溶解即可。
◆液体引物再稀释可用下列公式:
稀释引物要达到的浓度(pmol/ul)=母液浓度(pmol/ul)×汲取母液的体积(ul)÷(汲取母液的体积(ul)+加水量(ul))

引物一般来的时候是干粉。这种状态能保存最长的时间。
如果用的话要先离心,5分钟(12000转)。然后用它上面写的nmol*1000/你的终浓度=你要加的水量
溶解液有TE和dd水。TE其实就是tris盐酸和EDTA的混合液。理论上用TE保存好,不容易降解。
一般配的时候要先配成储存液(浓度是100umol/L),在配成使用液(浓度是10umol/L)。这样的好处是引物不容易降解。
引物忌讳反复冻溶,大家要注意。如果你都配成了使用液就应该分装。使用液放在4度(2/3个月没问题的),储存液放在-20度。

引物稀释很简单,一般装引物的管子上都标有引物的量如3.6nmol/OD, 可直接往管中加360ul的无菌双蒸水溶解就可以了,在加水之前要先高速离心管子几分钟,加水后要高速漩涡混匀几分钟就可以用了,此时的储存浓度是10umol/L,如果体系是20ul一般加1ul引物(引物的使用浓度最大为10pmol/ul,但一般在0.5-5pmol/ul即可 )。

引物的浓度设定,不同的人有不同习惯,有的喜欢稀释成100uM的,有的习惯于稀释成20uM,也有的稀释成10uM的。建议稀释成20uM的浓度,因为如果你稀释成100uM,当你所做PCR的体系不是很大的时候,体积太小了引物就不好加,容易产生误差;如果是稀释成10uM,引物浓度过低,容易降解。不过不管你稀释成多大浓度的,最好分装保存,免得反复冻融容易降解。

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