请教western blot孵一抗
刚做western blot没多久，做了几次都没结果，之前孵一抗是用pbs+BSA稀释的，但是后来看抗体(cell signaling)说明书说用TBS+0.1% Tween-20+5%脱脂奶粉。请问1.两者有什么不同2.TBS配方是什么，最好是直接有称量的克数， 十分感谢!!!!下面是说明书For western blots, incubate membrane with diluted antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween-20 at 4°C with gentle shaking, overnight.
最佳答案
回答者：网友
1.TBS和PBS的缓冲体系不同，TBS用Tris做缓冲，PBS用磷酸盐做缓冲。实际使用中360问答差别不大。
Tween-20是一种去污剂，可以降低非特异结合带来的背景。你上面提到的TBS+0.1% Tween-边20+5%脱脂奶粉，其中的TBS完全可以被PBS代替。脱脂奶粉也可以用BSA代替，不过脱脂奶粉要便宜许多。
不知道你说的“做了几次都没结果”是怎么样没结果，膜都是黑的，还是都是白的?这是两种完全不同的“没结果”。如果膜欢爱别值草极掌是黑的，说明背景太强，加入Tween可能会改善一些。如果升终要膜是白的，那和PBS或者TBS关系不大，说明你实验中有些关键试剂或步骤有问题，比如抗体或者转膜过程，你需要调一个一个去核实。
2. 网上TBS配方很多，自己搜一下吧，效果不会际斯齐额击构刘否下犯差太多。
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